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蓝白斑筛选原理
作者:于老师    文章来源:成长博客    点击数:    更新时间:2011-4-2

蓝白斑筛选原理

  大肠杆菌β-半乳糖苷酶可分成2部分即α肽段(N-端的146aa)和C-段。α肽段的基因位于载体上并含有不影响其ORFopen reading )的多克隆位点(MCS),而C-段的基因位于工程菌E. coli DH5α上。二者在同一菌株中表达时,菌株中的C-段与载体上的α肽段互补而具有酶活性,能将无色化合物X-gal(5--4--3-吲哚-β-D-半乳糖苷)切割成半乳糖和深蓝色的物质5--4-靛蓝。在MCS上插入新基因将会改变其ORF而使得载体上的α肽段不能与菌株中的C-段互补而不能无色化合物X-gal(5--4--3-吲哚-β-D-半乳糖苷)切割成半乳糖和深蓝色的物质5--4-靛蓝产生白斑。选择转入的阳性克隆即选择白斑。


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